欧盟GMP附录《无菌药品生产》将于2023年8月25日生效，其对生物指示剂（BI）的要求主要包含以下几方面：

【储存和使用】BI的储存和使用应该参考供应商的说明书。
验证过程中放置在合适位置的合适的BI应该作为灭菌过程验证的附加方法。
如果BI用于验证过程，应该在每个灭菌周期放置阳性对照。
使用BI时，应注意防止BI的微生物污染生产或其他测试过程。延伸阅读：生物指示剂是一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设备的性能，灭菌程序的验证，生产过程灭菌效果的监控等。目前市面上使用较多的生物指示剂（BI）有自含式、载体型生物指示剂以及芽孢悬液生物指示剂。自含式生物指示剂使用较为方便，如下图所示，灭菌后将“含有培养基的安瓿瓶”挤破，即可直接培养。自含式生物指示剂系统所用的材料不应含有或在使用过程释放出抑制残存微生物生长的物质。整个系统的设计应能够承受运输和使用过程中的影响，不发生破损，并使原始接种的微生物损失减少到最小。

载体型生物指示剂由孢子条和培养基两部分组成，在灭菌结束后需要在层流保护下将孢子条额外放于预定的培养基中进行培养，载体可以是碟形或条状的滤纸、玻璃、塑料或其他材料。芽孢悬液生物指示剂：该类生物指示剂是将芽孢混悬于液体中。若用于液体物品灭菌，必须测定生物指示剂在灭菌液体物品中的芽孢数和D值。【BI供应商】
BI 的可靠性很重要。供应商应该是合格的，并且应该控制运输和储存条件，以确保 BI质量不受影响。延伸阅读：针对常见的生物指示剂供应商，考虑到生物指示剂可能发生生物污染的特殊性，企业应对生物指示剂的制造商进行必要的审计。审计时可以考虑以下内容：1菌株选择和保存；2试验微生物繁殖，包括生长培养基及各种成分，生长温度和培养时间；3试验微生物收获，纯度和洁净度；4试验活菌量和试验微生物的生物化学特性；5证明用于制造生物指示物的各个部分如载体材料和内层包装规格，并考虑这些材料可能对试验微生物产生毒性作用；6供给生物指示物生长培养基的一致性（如促生长、pH、稳定性等）及用量；7有效期内，试验微生物存放的稳定性的相关证据；8质量体系及检验能力等。

注：上图为某细菌内毒素企业的一份出厂COA，该COA中3个人员对日期的签名就有3种方式，从这里对其质量体系也能做一些推测。【BI质量标准】
在使用新的批次/批次 BI 之前，应验证批次/批次的指示生物的数量、纯度和鉴别。对于其他关键参数，例如D值，Z值，可以使用合格供应商提供的检验报告COA。延伸阅读：接收商品化生物指示剂时，应进行微生物纯度和形态的鉴定及测定微生物数量。生物指示剂应在有效期内使用，必要时应重新进行耐受性检查。企业应当建立各种生物指示剂对应质量标准，并依据质量标准进行放行。质量标准应至少包括：纯度、形态、微生物负载量。总之，在灭菌验证过程中应合理地选择和使用生物指示剂。在灭菌程序的建立、确定、验证和日常监控中，需对灭菌产品(包括其材料和包装)进行全面了解，确保灭菌参数能达到所需的无菌保证水平。生物指示剂的初始微生物的数量、耐受性(菌体耐受性)和放置的位置、方式等情况都会影响其灭活效果。